ELISA法鉴别口蹄疫野毒与疫苗技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄类动物的急性、发热性、接触性强的传染病。世界动物卫生组织（OIE）将该病列为甲类牲畜传染病。大多数亚洲、非洲和南美洲国家一直通过注射灭活疫苗来控制该病的流行。自2001年英国爆发口蹄疫以来，欧盟允许在口蹄疫爆发期间紧急接种疫苗。因此，建立准确、快速的鉴定野生口蹄疫病毒和疫苗的方法，对于疾病控制、食品安全和进出口贸易具有十分重要的意义。以下是国内外鉴定野生口蹄疫病毒和疫苗ELISA方法的技术介绍： 一种间接酶联免疫吸附试验（I-ELISA）可区分灭活疫苗免疫牛口蹄疫病毒感染.通过对336份正常牛血清、508份接种牛血清、60份人工感染牛血清和58份豚鼠免疫血清的检测，确定了血清抗体阴性和阳性滴度的临界值。 336份正常牛血清样本检测结果特异性为98.21%； 508份牛血清标本接种1-2次灭活疫苗后1-6个月检测结果特异性为98.62%；检测结果表明，I-ELISA的检出率为95.00%（按D值0.400为阳性统计）。阮丽等。华中农业大学兽医学院等利用大肠杆菌BL21(DE3)表达3B蛋白，建立了间接酶联免疫吸附试验(I-EIISA)方法区分口蹄疫病毒感染猪和疫苗接种猪。上海市农业科学院畜牧兽医研究所潘杰等以大肠杆菌表达重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB为检测抗原，研制出口蹄疫-口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA检测试剂盒，可用于判断受检动物是否感染口蹄疫病毒。在1746份免疫猪血清中，3AB-ELISA对免疫猪血清的特异性为98.68%；在1077份健康未免疫猪血清中，3AB-ELISA对健康未免疫猪血清的特异性为98.68%；在人工感染猪的血清中，3AB-ELISA的阳性检出率为100%。 3AB-ELISA检测2031份免疫牛血清，特异性为94.04%； 3AB-ELISA检测了336份健康的未免疫和未感染的牛血清，特异性为97.96%。台湾屏东科技大学兽医学系以杆状病毒表达的重组非结构蛋白3AB为抗原，建立ELISA法鉴定猪口蹄疫病毒感染。母猪接种了10次口蹄疫疫苗，检测结果仍为阴性。用上述诊断试剂检测100份未免疫和未感染猪血清和106份免疫猪血清，阴性率分别为99.1%和100%；检测感染猪血清120份，阳性率为95.8%。意大利IZSLER实验室以大肠杆菌中表达的非结构蛋白3ABC-FMDV为抗原，建立了间接ELISA方法来鉴定口蹄疫病毒感染。以光密度0.20为截断值，检测137份感染血清，阳性率为100%； 1次接种检测血清228份，阴性225份； 159份多次接种血清均为阴性，转阴率为99%。 %。检测的4444份天然健康动物血清中，442份为阴性，特异性为99.5%。阿根廷CICV以原核生物表达的3AB1蛋白为抗原，建立了间接ELISA方法鉴定口蹄疫病毒感染。截止值设定为感染后21 天最大吸收值的35%。该方法共检测出118份实验感染血清，阳性率为97.5%。 109份未免疫未感染血清，阴性率为100%。 102份初次免疫血清和30份二次免疫血清经上述试剂检测均呈阴性。意大利E.Brocchi等比较了6种ELISAs试剂鉴定口蹄疫病毒感染的性能，通过比较3551份血清（包括健康血清、免疫血清、感染血清和免疫/感染血清，其中2/3为牛血清，其余根据羊和猪血清的检测结果分析，发现Cedi-diagnostics和IZS-Brescia生产的试剂性能与OIE诊断中描述的NCPanaftosa-筛选指标相当手动的。用以上三种试剂诊断免疫牛口蹄疫病毒感染的特异性超过99%，敏感性达到90%。